miRNA通过与转录本相互作用关闭或抑制基因表达近研究表明们影响了约三成基因miRNA多组织差异表达让表达图谱分析成研究重点同时miRNA过表达和抑制也近年来常用研究方法 而 Peng Jin(埃默里大学) 我们使用RNA oligo和载体方法对于RNA oligo方法我们采用类似siRNA双链miRNA及anti-miRNA来增加或阻断特定miRNA活性种方法便于操控细胞培养特定miRNA活性 载体方法有着长期改变优势能够追踪别细胞我们利用人工shRNA质粒或Pol II表达载体来过表达特定miRNA对于miRNA下调我们要表达shRNA能产生与miRNA前体茎环结构互补siRNA要使用miRNA海绵(miRNA sponge)能特定miRNA多目标位点表达报告基因 Winston Kuo(哈佛大学) 目前有两种通用策略:1) 基于载体或病毒miRNA或miRNA反义链序列过表达;2) 外源miRNA双链或反义抑制剂转染方法选择取决于实验设计 般说来我们倾向于外源试剂转染载体/病毒策略还依赖Drosha/Dicer酶对转录本顺序加工且必须通过Exportin 5从核输出人类癌细胞系曾报道过Drosha和Dicer水平miRNA加工缺陷此外Exportin 5也被认细胞和小鼠模型miRNA生物发生途径瓶颈外源过表达饱和Exportin 5从而胜过内源小RNA序列极端情况下会引起细胞或动物死亡外源双链转染直接进入RISC复合物因而绕过了些陷阱 当需要持久功能获得或功能丧失时还需要载体或病毒稳定表达稳定细胞系必须小心地建立采用病毒滴度测定来避免上述问题 Joshua Mendell(约翰霍普金斯大学) 对于miRNA上调我们常常构建表达载体制备起来非常简单我们只扩增miRNA发夹结构及些侧翼序列并直接克隆PCR产物有时候我们也用合成miRNA模拟物来瞬时转染细胞过表达miRNA 了抑制miRNA我们般使用市场上反义寡核苷酸我们使用Dharmacon和Exiqon抑制剂都获得了成功些试剂局限于们只能瞬时作用了实现稳定抑制我们开始用所谓miRNA海绵们实际上有着多miRNA结合位点捕获转录本能隔离细胞有活性miRNA Silvia Monticelli(瑞士生物医学研究所) 我们主要使用慢病毒或反转录病毒系统因我们主要研究原代细胞而且需要长时间持续表达取决于细胞类型我们也使用lipofectamine或Amaxa来瞬时转染对于下调我们正使用miRNA海绵对于短期研究miRNA抑制剂瞬时转染效也好 Galina Gabriely(哈佛大学) 了评估处理miRNA活性我们测定了与miRNA结合位点融合萤光素酶表达过评估miRNA活性佳方法评估天靶点表达(miRNA靶点已知)通过western blot分析来进行miRNA表达调节用northern blot分析来评估miRNA表达水平某些情况下定量RT-PCR也能给出miRNA表达靠结miRNA调节所使用寡核苷酸会PCR反应干扰引物从而影响真实表达数据 Winston Kuo(哈佛大学) 我们使用几种策略包括miRNA qPCRmiRNA northern blot萤光素酶报告分析mRNA靶点qPCR及蛋白靶点western blot上面我已经讨论了miRNA qPCR和northern blotting些能够直接检测miRNA过表达或下调萤光素酶报告分析包括3’-UTR序列克隆萤光素酶编码序列下游些3’-UTR包含了人工miRNA同源位点或已验证mRNA靶点内源序列策略关键对照生成假定同源位点上种子序列点突变些点突变使miRNA能调节萤光素酶表达 Joshua Mendell(约翰霍普金斯大学) 了验证miRNA上调我们还使用northern blotting或实时定量PCR来测定miRNA丰度测定miRNA抑制没简单反义oligo确实降低了miRNA丰度因此也用同样方法来监控miRNA抑制过体内miRNA隔离会总让miRNA丰度下降另方法用报告基因重组子来监控miRNA抑制miRNA会抑制报告基因表达除非活性受阻当种报告基因使用般受限于细胞培养环境 Silvia Monticelli(瑞士生物医学研究所) 些实验关键步:通过转染或转导细胞有效地改变了们因此确需要多对照来确认所看结来自miRNA表达或下调对miRNA尤其重要因多情况下并期待强表型寻找微调基因表达温和效我想至少需要目miRNA之外miRNA和种子区域突变体我还推荐使用同方法来设法获得相同结
【最满意的一点】经典，加速能力好。【最不满意的一点】车型太老，很多改装件都买不到。【空间】不错，空间安排合理。后排的空间对于两门跑车来说比较宽敞，后备箱是掀背的，空间大。【动力】离合器很轻，动力强。加速快，轻点油门就能很快加速。推背感强。【操控】操控好，过弯时反应迅速。避震性能好。【油耗】油耗在跑车中算低吧，很实惠。【舒适性】还行，原厂的座椅很平，比较空，所以我换了桶形座椅和四点式安全带。【外观】不错，我改装了空气动力大包围，车身更具有动感，车头灯是跳灯很经典。【内饰】原厂的内饰很简单，我改装了方向盘，仪表盘，中控台，三个踏板，手刹和变速杆。使车内更有战斗范儿。【性价比】还行，购入时14万，在跑车中算便宜了。【其它描述】上传的照片是改装前的。我给我的爱车换了碳纤维引擎盖，改装轮毂，制动卡钳，碳化打孔划线来令片，空气动力大包围和LED车灯。加装了涡轮增压，MAX点火系统，改装进气歧管，泄压阀和尾翼。现在车子的动力很强应该有230马力了，我很喜欢。
这是13
= =LZ是男生OR女生.... SERENA (拉丁)"温和；沉著的"。SERENA给人两种不同的印象：可爱活泼充满惊喜的女孩；或是文静胆怯，虔诚的信徒。 SHARON(希伯来文)同Sarah。大部份人期待的Sharon是娇小可爱，中层阶级的金发女子，友善，甜美，聪慧。有人则认为Sharon是害羞迟钝的。 SHELLEY(老式英语)意为州的牧场，同SHEILA,SHELBY,SHIRLEY。SHELLEY给人两种不同的印象：一个是可爱聪明，眼高于人的中学美少女；或是愚蠢又矮又胖多话的女孩。 SHERRY,CHERIE同CHARLOTTE,CHER,SARAH,SHIRLEY.大部份人把SHERRY想成可爱娇小，圆润的金发女孩，友善，逢场作戏，然而却十分健忘。 SHIRLEY(老式英语)"来自耀眼的牧场"。 SILVIA(拉丁文)/"来自森林/"，在多数人的心里，SILVIA是个美丽富有的女人，冷静，循规蹈矩，精明的女商人。 STACY ANASTASIA的简称。STACY被形容是娇小可爱，年轻的红发女子，活泼，外向喜欢开玩笑。 STELLA(拉丁)/"星星/"之意；ESTELLE的简写。大部份人认无STELLA是穿著朴素，古板，努力的工作者，反应迟钝号发牢骚者。 STEPHANIE(希腊)皇冠的意思。STEPHEN的女性型式。大部份的人认为STEPHANIE是纤细，美丽的女性，世故非常自我-模特儿，大概是吧。有些人认为她是非常善良的女孩。 SUE Susan的简写。Sue给人两种不同的印象：一是传统家居的美国女孩，既甜美又体贴；或是美丽，有著致命吸引力的女人。 SAM 为SAMSON，SAMUEL的简称。人们印象中的SAM是个强壮的，温和，忠实脚踏实地的人，而且是可以交心的朋友。代表人物是人人皆知的UNCLE SAM SAMUEL (希伯来文)，schama(意为『听』)和El(意为『上帝』)连成的。其完整意思为"被上帝听到的人"。这和圣经中的传说有关。圣经说预言家Samuel的母亲把他的降生看作是上帝对她的祷告的回报。 SEAN 为John的爱尔兰形式。 SHAWN 被形容为阴晴不变独来独往的人如西恩潘，或是英挺，刺激，上流社会的英国人，如史恩康纳莱。 SHAWN为John,Sean的爱尔兰形式。 SHAWN被形容为英俊的年轻人，活泼，受欢迎，温和。 SIDNEY (法文)由圣者丹尼士衍生出。SIDNEY这个名字令人联想到学有专长的专家英俊又善良。虽然有人认为SIDNEY是反传统且不按牌理出牌之人。 SIMON 希伯来人，意为听者。SIMON被视作强壮魁梧的男子，若非有着安静简朴的个性就是聪明而富创造力。 SOLOMON 希伯来文，意为平静的小人。令人联想到矮小，秃头犹太教师或先知，强壮温和，又睿智。 SPARK (美国)"闪闪发光"，SPARK被人们描绘为充满活力的人-反应灵敏，生气蓬勃并为人们带来快乐的人。 SPENCER 来自法语，意为仓库保管人或粮食分配者。人们对他的印象直接来自SPENCER TRACY。人们想象中的SPENCER是灰发的年长男子，极为幽默。 SPIKE 又长又重的钉子。SPIKE被描绘为独立强悍的街头老大，可能是莽夫或拳击手。有些人则以为这个名字很适合狗；我就认识一只叫SPIKE的狗。 STANLEY (古式英文)来自牧草地。STANLEY这个名字给人两种印象：安静，年长蓝领劳工或是瘦骨如柴的怪人。 STEVEN 同Stephen。人们心目中的Steven是高壮，英俊的男子，沉静，斯文有礼，性格和善。 STUART 原为苏格兰语，看管家畜的人，有时可解释成看管物业的人。给人两种印象：雄壮威武的高手或是聪明教养良好的士绅。 转于百度
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